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HPLC中离子排斥色谱柱死体积该如何计算?

发布时间:2022-09-23

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  各位小伙伴都听说过死体积吧。死体积越大,导致样品扩散的空间很大,色谱峰会更容易展宽,峰形变差。那么死体积该如何定义呢,死体积大小如何计算,这里小编就给各位小伙伴做个介绍。
 
  死体积的定义:
 
  死体积狭义上指的是Hamilton 离子排斥色谱柱中未被固定相占据的空隙体积,即色谱柱内流动相的体积。广义上的死体积是指进样位置(进样口)到检测位置(检测器流通池)这一段的体积(PS:除去色谱柱中填料体积),一旦色谱柱连接,这段体积(图示橙色管路)是不变的(死的)。
 
  HPLC中离子排斥色谱柱死体积该如何计算?
 
  死体积(dead volume,V0)——由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分:进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙(被流动相占据,Vm)、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与色谱平衡过程,其它3部分只起峰扩展作用。为防止峰扩展,这3部分体积应尽量减小。
 
  死时间(dead time,t0)——不保留组分的保留时间。即流动相(溶剂)通过色谱柱的时间。
 
  测量系统死体积通常需要通过实验进行测量,常用方法是通过进一针和色谱柱固定相没有任何作用的特殊溶液(方法中会有规定,例如:尿嘧啶,少量NaNO3或甲醇溶于流动相得到的溶液,也有直接用*色谱纯甲醇进样的情形)时,就会得到一个色谱峰,由此峰可以测得死时间(t0),这就是t0的实测结果。
 
  然后通过计算得到系统死体积:
 
  死体积(V0) = 死时间t0×流动相的流速F。
 
  减小死体积的注意事项:
 
  在我们使用或维护的过程中,如果涉及管路等配件的更换,应该选择与原规格一致的配件,以确保死体积与原来一致,避免死体积的增加而带来峰形的展宽。
 
  接装色谱柱时,需确保管线接头匹配完好(特别注意peek管接头的使用,以及管线与色谱柱的连接处)避免形成接头空腔.
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