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反相色谱柱使用维护事项的分享
点击次数:1104 发布时间:2019-11-04
液相色谱柱按照其色谱分离模式来分,大致可分为正相、反相、离子交换、疏水作用、体积排除、亲和以及手性等类型。其中反相色谱柱是以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。


反相色谱柱
键合相主要包括:C18、C8、C4、Phenyl、aQ、等。对于以上反相色谱柱,我们在使用及维护的时候可以按照同样的方式:


1、在条件允许情况下,在使用前需要对新色谱柱按照说明书方法进行柱效测试。以确保色谱柱的正常。


2、所有硅胶基质色谱柱使用温度应低于60℃。


3、样品

建议将样品溶解在流动相或极性相近的溶剂中。如果使用梯度洗脱,则需要将样品溶解在初始流动相或极性相近的溶剂中。样品溶液不应含有任何颗粒物,使用0.5μm或更小粒径的滤膜过滤。样品溶液如果使用强溶剂(例如,流动相为水,样品溶剂为甲醇),为达到较好峰形,需要降低进样量(以250x4.6mm规格为例,小于10μL)。


4、流动相

所有流动相,特别是含有缓冲盐的流动相,建议当日实验当日配制;如果使用了前日配制的流动相,请确保流动相pH值没有变化,并确保流动相没有长菌。 流动相的pH值取决于您的应用和色谱柱填料类型。我们建议在所有的色谱柱尽量在pH2~8范围内使用。请尽量避免在常规流动相中使用很高比例的水(>95%)作为流动相,可能会造成保留时间的不稳定或者色谱柱键合相的损害。如果使用高比例水或者100%水相为流动相,建议使用亲水柱,例如Hypersil GOLD aQ、Syncronis aQ、AcclaimPolar Advantage Ⅱ等色谱柱。


5、色谱柱平衡

在进行分析之前,请使用至少20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱,以使色谱柱达到平衡。

色谱柱的柱体积可以通过以下公式估算:

V=0.68πr2

V为色谱柱柱体积(mL),r为色谱柱内径(cm),L为色谱柱长度(cm)。


6、色谱柱保护

对于“脏”的样品以及组分未知的样品,请尽量使用在线滤器或保护柱,如果可能,使用SPE小柱对样品进行前处理是更好的选择。上述做法可以有效延长色谱柱使用寿命。


7、色谱柱清洗

在储存色谱柱之前,请使用至少20倍柱体积的不带缓冲盐的流动相冲洗色谱柱(去除缓冲盐),再用更强的溶剂冲洗色谱柱(去除强保留成分,反相色谱通常使用甲醇或乙腈),然后使用合适的溶剂储存色谱柱。


8、 色谱柱保存

反相色谱柱,保存溶剂通常是含至少30% 有机相的水溶液,也可在常规清洗后直接保存在有机相中。

如果需要长时间储藏,则需要使用较高比例的有机相(有机相比例至少大于50%)