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正相色谱和反相色谱究竟有何不同?答案其实很简单

发布时间:2021-10-15

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高效液相色谱(HPLC)法选择性高、灵敏度高、分析速度快,是现代分离测试的重要手段。色谱柱作为高效液相分离系统的中的重要环节,色谱柱的类型决定了色谱系统的性质,色谱柱的粒径和长度影响了分析时间和分析效率。

氨基柱、苯基柱、氰基柱等正相色谱柱和C18、C8等反相色谱柱是色谱分析工作中常见的两类色谱柱。正相色谱和反相色谱的区别本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强;反相色谱柱填料极性弱,洗脱顺序由强到弱。

正相色谱:采用极性键合固定相,硅胶表面键合的是极性的有机基团,键合相的名称由键合上去的基团而定。最流动相一般用比键合相极性小的非极性或弱极性有机溶剂,如烃类溶剂,或其中加入一定量的极性溶剂(如氯仿、醇、乙腈等),以调节流动相的洗脱强度。分离机制属于分配色谱:组分的分配比K值,随其极性的增加而增大,但随流动相中极性调节剂的极性增大(或浓度增大)而降低。同时,极性键合相的极性越大,组分的保留值越大。该法主要用于分离异构体,极性不同的化合物,特别是用来分离不同类型的化合物。分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。


反相色谱:用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
 
 

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