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操作Hamilton 阳离子交换柱纯化蛋白常见问题
点击次数:1271 发布时间:2016-10-28
采用Hamilton 阳离子交换柱纯化蛋白时,洗脱采用的离子强度的大小范围应该如何确定,可以根据什么来调整洗脱时的离子强度?
Hamilton 阳离子交换柱离子交换纯化是利用离子交换剂上的可解离基团(活性基团)对各种离子的亲和力不一样人达到分离的目的的一种分离技术。离子交换剂是含有若干活性基团的不溶性物质,即在不溶性母体上引入若干可解离基团而成,根据引入解离基团的不同,可以分为阳离子交换剂和阴离子交换剂。各种离子对离子交换剂的亲和力各不相同,亲和力随离子的价数与原子序数增加而增加,而随离子水化膜半径的增加而降低。对具体离子交换纯化,需要主要离子交换剂的选择和处理。洗脱不同蛋白的zui恰当的离子强度液不一定一样,通常采用浓度梯度和PH梯度相结合的方式洗脱,纯化不同的蛋白先摸一摸洗脱液的离子浓度和PH值,其具体的离子浓度范围可以很大,0.01mol/l到1mol/l,甚至3.0mol/l,PH值的范围液很广。
Hamilton 阳离子交换柱因为蛋白是通过静电引力可逆的结合在离子交换树脂上,要使蛋白与离子交换树脂之间离子键打开,zui常用的方法就是加大反荷离子的浓度。不同反荷离子与树脂亲和力是不同的,其强弱关系为: 阳性竞争离子:Ag+》CS+>K+>NH4+>Na+>H+>Li+ 阴性竞争离子:I->NO3->(PO4)3->CN->HSO3->Mg2+>HCO3->HCOO->CH3COO->OH->F- 如果某种离子溶液洗脱效果不好,可用另一种亲和力强的离子代替。
离子交换柱属于弱离子交换剂,只有在一定的pH值范围内,才能有离子交换能力。